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文章背景簡介

BACKGROUND INTRODUCTION

由于霉菌毒素污染的普遍性和嚴重后果，開發(fā)沒有昂貴儀器和專門技術人員的廉價檢測平臺來進行高通量霉菌毒素分析，具有十分重要的意義。由于酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）具有簡單、成本低、效率高等優(yōu)點，且可以肉眼觀察讀出信號，是一種很有前途的方法。但傳統(tǒng)ELISA靈敏度較低，并不適用于在資源受限的區(qū)域進行肉眼現(xiàn)場檢測。

金納米粒子（AuNPs）具有高消光系數(shù)、獨特的局域表面等離子體共振（LSPR）特性，產(chǎn)生的比色信號比傳統(tǒng)的ELISA方法靈敏得多。聚合誘導的AuNPs LSPR變化總是導致明顯的顏色對比變化，其范圍可從紅色到藍色，極易被肉眼識別。此外，比對傳統(tǒng)ELISA，等離子體酶聯(lián)免疫吸附試驗（pELISA）具有高通量、高靈敏度等優(yōu)點，已經(jīng)引起了人們的廣泛關注。但是在pELISA平臺的開發(fā)中，利用酶催化來觸發(fā)AuNP聚合仍然是一個挑戰(zhàn)。目前僅有堿性磷酸酶、乙酰膽堿酯酶、葡萄糖氧化酶等幾種酶在免疫檢測平臺中被成功用于引發(fā)AuNP聚集。其中過氧化氫（H2O2）是多種酶催化的通用底物或產(chǎn)物，因此H2O2誘導的AuNP聚合具有多用途。

2018年8月，南昌大學XiruiChen等人在《Talanta》（IF＝ 4．916，化學2區(qū)）上發(fā)表了題為“A colorimetric immunoassay based on glucose oxidase－induced AuNP aggregation for the detection of fumonisin B1”的論文。提出了一種新的pELISA來檢測伏馬菌素B1 （FB1）的方法，通過結合酪胺的h2o2介導的苯酚聚合以及AuNP與酪胺之間的強靜電相互作用，可以誘導AuNP的聚集，從而可以進行肉眼觀察。

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所用到的主要方法

METHODS

（1）紫外－可見分光光度法

（2）透射電子顯微鏡

（3）等離子體酶聯(lián)免疫吸附試驗

（4）高效液相色譜－熒光檢測

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文章主要內(nèi)容摘要

ABSTRACT

在資源有限地區(qū)進行高通量篩選檢測和現(xiàn)場診斷時，裸眼比色法檢測具有廣闊的應用前景。本文開發(fā)了一種新的直接競爭的等離子體酶聯(lián)免疫吸附法（dc－pELISA）用于檢測伏伏菌素B1（FB1），該方法基于金納米顆粒（AuNP）聚合，具有高靈敏度和強的裸眼讀出信號。通過辣根過氧化物酶（HRP）／過氧化氫（H2O2）／酪胺（TYR）體系誘導AuNP聚合，導致了從紅色到藍色的明顯變化。在該體系中，通過葡萄糖氧化酶（GOX）介導的葡萄糖氧化反應產(chǎn)生H2O2，使用FB1－GOX作為競爭性抗原。所建立的pELISA對fb1在3．125 ng／mL 到25 ng／mL 之間有很好的線性檢測，顏色由深藍變?yōu)榧t色，肉眼觀察的截止限為12．5 ng／mL。添加fb1的玉米樣品平均回收率為76．5％ ～ 96．8％，相對標準偏差為4．88～ 16．4％。同時，該方法與傳統(tǒng)的ELISA方法在盲檢方面有很好的一致性（R2＝ 0．927）。此外，該方法對fb1玉米樣品的測定結果與超高效液相色譜法的測定結果也有很高的一致性。這些結果表明：本文提出的比色法ELISA在定量檢測玉米樣品中的FB1時，具有很好的準確度和精密度。