前言

PD－1和CTLA－4已獲得令人印象深刻的結(jié)果，但并非所有患者都可受益。

T細(xì)胞活化的V結(jié)構(gòu)域Ig抑制因子（VISTA）是一種新的免疫調(diào)節(jié)受體，廣泛表達(dá)于髓系和淋巴細(xì)胞上，常被認(rèn)為是多種癌癥預(yù)后不良的指標(biāo)。重要的是，VISTA的抗體靶向同時作用于固有免疫和適應(yīng)性免疫。VISTA的廣泛表達(dá)使其相比其他免疫檢查點擁有更高的非冗余活性，使VISTA成為一個非常具有前景的腫瘤免疫治療靶點。
VISTA的結(jié)構(gòu)與表達(dá)

VISTA是一種表達(dá)在造血系大多數(shù)細(xì)胞亞群上的免疫調(diào)節(jié)受體。髓系細(xì)胞表達(dá)最高，小膠質(zhì)細(xì)胞和中性粒細(xì)胞表達(dá)水平顯著增高。其次是其他髓系亞群，包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。與激活后不同階段誘導(dǎo)的其他檢查點不同，VISTA在這些亞群上以穩(wěn)態(tài)的形式表達(dá)。

這種廣泛而獨特的表達(dá)模式意味著在調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)反應(yīng)和區(qū)分免疫調(diào)節(jié)受體的前景方面具有重要的穩(wěn)態(tài)作用。在淋巴細(xì)胞上，VISTA在原始CD4＋T細(xì)胞以及FoxP3＋T調(diào)節(jié)細(xì)胞（Tregs）上表達(dá)最高。它在CD8＋T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞亞群和胸腺細(xì)胞上的表達(dá)水平較低。雖然VISTA在B細(xì)胞上沒有表達(dá)，但它在漿細(xì)胞上顯著表達(dá)。此外值得注意的是，研究發(fā)現(xiàn)在炎癥條件下檢測到VISTA的表達(dá)降低。

VISTA總長279個氨基酸，包括162個氨基酸的胞外結(jié)構(gòu)域、21個氨基酸的跨膜結(jié)構(gòu)域和96個氨基酸的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。在胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域中沒有基于酪氨酸的免疫受體信號基序。然而，存在蛋白激酶C和酪蛋白激酶2磷酸化的潛在位點。系統(tǒng)發(fā)育和蛋白質(zhì)序列分析顯示VISTA和B7家族成員之間有相似之處，其中包含一個保守的免疫球蛋白V型折疊。

然而，VISTA與這些蛋白質(zhì)之間有許多顯著的區(qū)別。VISTA的胞外結(jié)構(gòu)域與典型的B7 IgV折疊相比存在多種差異。經(jīng)典的B7家族折疊包含9個β鏈，而VISTA包含10個；代替較長的β鏈C′，VISTA－ECD在其帶正電的區(qū)域內(nèi)含有一個額外的螺旋序列（FQDL）；VISTA包含一個由21個殘基組成的C－C′非結(jié)構(gòu)環(huán)，這在所有B7家族中是獨有的；VISTA含有兩個額外的二硫鍵，這也是在所有其他B7家族蛋白質(zhì)中都不存在；VISTA僅包含一個類似IgV的結(jié)構(gòu)域，而所有其他B7家族成員都包含IgV和IgC結(jié)構(gòu)域。

多項研究推斷VISTA可同時作為配體或受體發(fā)揮作用。B7家族中B7－1（CD80）、B7－2（CD86）、B7－DC（PD－L2）、B7－H1（PD－L1）和B7－H3（CD276）含有2個IgV結(jié)構(gòu)域并表現(xiàn)出配體活性。相比之下，CD28、CTLA－4、誘導(dǎo)共刺激因子（ICOS）和PD－1具有單一的IgV結(jié)構(gòu)域，主要起受體作用。而VISTA也是由一個IgV結(jié)構(gòu)域組成的，因此推測VISTA可能主要作為一個受體發(fā)揮作用，許多研究證實了這一點。

VISTA的非腫瘤免疫研究

VISTA的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)仍然遠(yuǎn)未闡明。

已有的研究表明，轉(zhuǎn)錄因子p53和HIF－1α可以上調(diào)VISTA的表達(dá)。此外，與VISTA啟動子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子（TF）仍有多個候選，其中包括Fos、轉(zhuǎn)錄因子JunD和核因子κB（NF－κB）。由于這些TFs在炎癥條件下上調(diào)，預(yù)測它們可能是VISTA表達(dá)的潛在抑制因子。目前，還沒有已知的增強(qiáng)子可以調(diào)節(jié)VISTA的表達(dá)。

在人群中存在VISTA的基因多態(tài)性（SNP），其中rs3747869，它導(dǎo)致了D（天冬氨酸）到E（谷氨酸）的錯義變體，出現(xiàn)在研究人群的5－10％中。多個獨立研究表明，這種變異與攜帶者白細(xì)胞計數(shù)增加有關(guān)。另一個SNP，rs748113，出現(xiàn)在3′非翻譯區(qū)（UTR）中，與攜帶者淋巴細(xì)胞計數(shù)的下降有關(guān)。

除了自然發(fā)生的變異，VISTA基因在一系列癌癥類型中也觀察到了一些突變，盡管頻率很低。最常見的突變是位于86位的R（精氨酸）／C（半胱氨酸）替代，位于Ig樣V型結(jié)構(gòu)域，可能導(dǎo)致功能喪失。可能導(dǎo)致功能喪失的下一個最頻繁的突變發(fā)生在下一個位置87，其中R被替換為W（色氨酸）。這兩種突變主要見于胃癌和膀胱癌。

VISTA的配體

在開發(fā)成功的抗VISTA靶向藥物的過程中，一個關(guān)鍵的限速步驟是VISTA配體的長期知識空白。多個已發(fā)表的研究都強(qiáng)調(diào)了潛在的VISTA配體。最近，一項研究確定VSIG3（或IgSF11）為VISTA配體，這種相互作用有助于抑制T細(xì)胞反應(yīng)。由于VSIG3在造血細(xì)胞中的表達(dá)是無法檢測到的，這種相互作用在體內(nèi)的生理相關(guān)性仍有待驗證。

此外，有研究發(fā)現(xiàn)，VISTA和P－選擇素糖蛋白配體－1（PSGL－1）之間存在pH依賴性相互作用。研究人員強(qiáng)調(diào)了VISTA細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一個獨特特性，它富含組氨酸殘基。組氨酸的側(cè)鏈在酸性pH條件下發(fā)生脫質(zhì)子化，例如在TME中發(fā)現(xiàn)的側(cè)鏈，這種翻譯后修飾允許與PSGL－1結(jié)合。鑒于VISTA多聚體（包括VISTA－Fc）只在酸性條件下與白細(xì)胞結(jié)合，這種翻譯后修飾在決定VISTA配體相互作用中的重要性是不可低估的。

對這一發(fā)現(xiàn)的熱情有多種原因。首先，PSGL－1和VISTA在調(diào)節(jié)T細(xì)胞活性和腫瘤免疫方面的作用越來越受到重視。其次，pH和離子環(huán)境是調(diào)節(jié)免疫受體相互作用的一個新的和有價值的概念。這在離子環(huán)境在明顯影響T細(xì)胞免疫命運(yùn)的腫瘤中尤為重要。更重要的是，這項研究提出了一種創(chuàng)新的策略來構(gòu)建pH選擇性抗體，即配體只針對pH失調(diào)的部位（如腫瘤）。

VISTA在腫瘤免疫中的應(yīng)用前景

免疫治療已顯示出很好的治療效果，但僅限于少數(shù)患者。臨床研究已經(jīng)闡明了可以預(yù)測免疫治療反應(yīng)的不同表型。從癌癥患者身上采集的腫瘤組織的組織學(xué)切片顯示了三種不同的免疫模式，它們直接與反應(yīng)和治療效果相關(guān)。

第一種是免疫炎癥浸潤性腫瘤。這是由腫瘤實質(zhì)中存在的T細(xì)胞（CD4＋和CD8＋）以及髓系細(xì)胞來定義的。這些環(huán)境通常對檢查點分子如PD－L1、CTLA－4和VISTA進(jìn)行染色。這些腫瘤的促炎細(xì)胞因子水平也升高，這表明了一種活躍（但可能不足）的免疫反應(yīng)。因此，PD－1／PD－L1阻斷劑的臨床反應(yīng)主要發(fā)生在腫瘤呈炎癥的患者中。

另一個特征是免疫排斥腫瘤。這種腫瘤表型也顯示出豐富的免疫細(xì)胞。然而，免疫細(xì)胞不能穿透腫瘤的實質(zhì)，而是被排斥在腫瘤溫床周圍的基質(zhì)中。研究已經(jīng)證明VISTA缺乏或阻斷可以顯著地調(diào)節(jié)TME向更具促炎性的髓系表型轉(zhuǎn)變，這有利于腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞的浸潤。這些研究已經(jīng)在多種腫瘤模型中取得了成功，包括模擬人類免疫排斥的腫瘤。

特別有趣的是，最近的一篇論文表明，VISTA缺陷的髓系細(xì)胞，包括單核細(xì)胞腫瘤髓源性抑制細(xì)胞（MDSC）在遷移過程中存在缺陷。此外，VISTA缺陷小鼠的腫瘤明顯缺乏巨噬細(xì)胞。雖然抗VISTA對遷移的直接影響尚未被證實，但其作用機(jī)制可能是調(diào)節(jié)髓系細(xì)胞遷移和腫瘤從免疫排斥到免疫炎癥腫瘤的轉(zhuǎn)化。

免疫缺乏性腫瘤代表第三個特征。這種表型的特點是腫瘤實質(zhì)或基質(zhì)中缺乏腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞或其他免疫細(xì)胞。在這些患者中，腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞的產(chǎn)生是免疫治療成功的限速步驟和先決條件。有兩個跡象表明VISTA阻滯劑在這些癌癥的免疫治療中有很好的作用。首先，VISTA在髓系細(xì)胞上高度表達(dá)，包括抗原提呈細(xì)胞，例如巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞（dc）。

事實上，已有的研究已經(jīng)表明VISTA阻斷劑增強(qiáng)了腫瘤相關(guān)樹突狀細(xì)胞的激活狀態(tài)，從而產(chǎn)生更多的炎性細(xì)胞因子并上調(diào)了這些細(xì)胞的共刺激和抗原呈遞分子。因此，VISTA有望增強(qiáng)腫瘤和引流淋巴結(jié)中髓系細(xì)胞的抗原提呈功能，從而提高腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞啟動和效應(yīng)器功能的潛力。

上圖總結(jié)了TME抗VISTA治療的最關(guān)鍵變化。除了腫瘤微環(huán)境的特性外，VISTA靶向治療的一個富有希望的方面是VISTA的抑制活性與PD－1／PD－L1通路無關(guān)。已經(jīng)有一些證據(jù)支持這一點。首先，在沒有VISTA和PD－1的情況下，T細(xì)胞反應(yīng)的程度協(xié)同增強(qiáng)。

更重要的是，阻斷VISTA和PD－1／PD－L1比靶向任何一種途徑更能增強(qiáng)腫瘤免疫功能。在結(jié)直腸癌患者和CT26模型中，研究發(fā)現(xiàn)VISTA是一個重要的MDSC檢查點，對T細(xì)胞反應(yīng)的最佳抑制至關(guān)重要。事實上，VISTA缺乏或阻斷降低了MDSC在體外和體內(nèi)對T細(xì)胞的抑制。

此外，有證據(jù)表明VISTA是原始T細(xì)胞的一個重要檢查點，它阻礙了T細(xì)胞激活的早期階段和從靜止到啟動的過渡。這提出了一個有趣的推測，在PD－1阻斷之前或同時靶向VISTA可能通過消除啟動和衰竭的限制來增強(qiáng)T細(xì)胞的反應(yīng)。

VISTA拮抗劑的開發(fā)進(jìn)展

鑒于VISTA靶向藥物在多種臨床前腫瘤模型中具有顯著的治療作用，VISTA特異性拮抗劑已經(jīng)進(jìn)入臨床。第一批進(jìn)入臨床的藥物之一是一種小分子，CA－170，由Aurigene開發(fā)。CA－170是一種口服PD－L1、PD－L2和VISTA檢查點拮抗劑，已被證明干擾VISTA抑制T細(xì)胞活化和細(xì)胞因子的產(chǎn)生。

CA－170的臨床開發(fā)（NCT02812875）正在進(jìn)行，評估在VISTA表達(dá)的腫瘤中潛在藥理活性劑量。除了這一階段的試驗外，Aurigene正在印度進(jìn)行第二階段的研究。

VISTA的單克隆抗體抑制劑也在商業(yè)和治療方面取得了進(jìn)展。2016年1月，Janssen啟動了抗VISTA拮抗劑（JNJ－61610588）的I期試驗，以評估治療晚期癌癥患者的安全性。JNJ－610588是一種IgG1抗VISTA單克隆抗體（mAb），已被證明對治療患者具有生物活性。

然而，2018年3月，Janssen因財務(wù)問題終止了本研究，所有藥品和數(shù)據(jù)均返回給ImmuNext公司，ImmuNext隨后在2020年初授權(quán)給了生物技術(shù)公司Curis繼續(xù)進(jìn)行臨床開發(fā)。此外，蜂鳥生物科學(xué)報告了一種抗VISTA抗體，該抗體正在為2020年的Ia／b期臨床試驗做準(zhǔn)備。

目前臨床上還沒有抗PSGL1抗體，但針對這一途徑的潛力得到了研究者和投資者的高度認(rèn)可。Verseau Therapeutics將主要專注于開發(fā)抗PSGL－1抗體（VTX－0811），他們認(rèn)為這種抗體可以將腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）重新編程為更具促炎性的抗腫瘤表型。

國內(nèi)方面，NextPharma數(shù)據(jù)庫顯示，蘇州思坦維公司已率先開展VISTA抗體的研發(fā)。

小結(jié)

盡管不像PD－1一樣熱門，但VISTA應(yīng)該會越來越受到關(guān)注，而且是一個非常有意思值得探索和跟進(jìn)的靶點。對VISTA配體或受體的越來越清晰的認(rèn)識將有利于后續(xù)的藥物研發(fā)。

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