BACKGROUND INTRODUCTION

在不同的外界因素影響下，血管平滑�。╲ascular smooth muscle cell，VSMCs）具有不同的細(xì)胞表型，具有極強(qiáng)的可塑性。正常血管中膜中的VSMCs是一種高分化的細(xì)胞，主要起維持血管形態(tài)以及收縮血管的作用，具有低增殖、低遷移、低蛋白分泌的特征；當(dāng)血管病變時VSMCs可以去分化成為未分化的細(xì)胞，細(xì)胞收縮性能下降，表現(xiàn)高增殖、高遷移、高蛋白分泌等特征。有研究發(fā)現(xiàn)，組蛋白去乙酰化酶9（histone deacetylase 9，HDAC9）基因座的人類序列變異與諸如大血管缺血性中風(fēng)、心肌梗塞、顱內(nèi)動脈瘤和主動脈鈣化等血管疾病相關(guān)，這表明HDAC9與心血管疾病有著密切的關(guān)系。

2018年，哈佛醫(yī)學(xué)院Christian L． Lino Cardenas等人，在《Nature Communications》雜志（IF2017＝12．353，綜合性期刊1區(qū)）發(fā)表了題為“An HDAC9－MALAT1－BRG1 complex mediates smooth muscle dysfunction in thoracic aortic Aneurysm”的文章。

所用到的主要方法

METHODS

1．RNA敲低實驗

2．劃痕實驗

3．微陣列

4．免疫印跡

5．RT－PCR

6．免疫沉淀（Co－IP）：以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)，用于研究蛋白質(zhì)間相互作用的經(jīng)典方法，是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。

7．酶譜法（Zymography）：基于SDS－PAGE電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，本文用于檢測MMP－2、MMP－9活性。

8．熒光原位雜交技術(shù)（Fluorescence in situ hybridization， FISH）：如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補(bǔ)的，二者經(jīng)變性－退火－復(fù)性，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。

9．染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）：在保持組蛋白和DNA聯(lián)合的同時，通過運用對應(yīng)于一個特定組蛋白標(biāo)記的生物抗體，染色質(zhì)被切成很小的片斷，并沉淀下來。

10．CLIP－seq （crosslinking－immunprecipitation and high－throughput sequencing）：紫外交聯(lián)免疫沉淀結(jié)合高通量測序，可以高通量研究RNA結(jié)合蛋白在體內(nèi)與眾多RNA靶標(biāo)的結(jié)合模式，并揭示其在一些重要生物學(xué)過程中的功能，是一項在全基因組水平揭示RNA分子與RNA結(jié)合蛋白相互作用的新技術(shù)。

ABSTRACT

胸主動脈瘤（TAA）與影響TGF－β信號傳導(dǎo)途徑成員的突變，或者影響血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）肌動蛋白細(xì)胞骨架成分及調(diào)節(jié)因子的突變有關(guān)。雖然這兩種不同突變在臨床上都表現(xiàn)出相似的表型，但其潛在的共同發(fā)病機(jī)制仍然時不清楚的。本文研究發(fā)現(xiàn)：影響TGF－β信號傳導(dǎo)和VSMC細(xì)胞骨架的突變都會導(dǎo)致形成三元復(fù)合物，這個三元復(fù)合物包括組蛋白去乙�；�酶HDAC9、染色質(zhì)重塑酶BRG1和長非編碼RNA MALAT1。這種HDAC9－MALAT1－BRG1復(fù)合物會結(jié)合到染色質(zhì)上，并抑制收縮蛋白基因表達(dá)，同時引起組蛋白H3－賴氨酸27三甲基化修飾增加。而Malat1或Hdac9的破壞則會恢復(fù)收縮蛋白表達(dá)，改善主動脈壁結(jié)構(gòu)，并抑制實驗性動脈瘤的生長。 因此，本研究證實：在兩種不同形式胸主動脈瘤（TAA）中，血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）功能障礙有著共同的表觀遺傳通路，這對其他已知的HDAC9相關(guān)的血管疾病也具有潛在的治療意義。