許多做出了偉大發(fā)現(xiàn)的科學(xué)家在回憶當(dāng)年的情況時(shí),都會(huì)說:“我偶然發(fā)現(xiàn)……”也許是一個(gè)反常的現(xiàn)象,也許是一串異常的數(shù)據(jù),又或者是一種從沒見過的奇怪事物。接著,根據(jù)教科書或史書上的記載,他們就順理成章地做出了偉大發(fā)現(xiàn),仿佛真理只是散落在草叢里閃閃發(fā)亮的寶石,運(yùn)氣好的話彎腰撿起就能發(fā)大財(cái)。

當(dāng)然,事實(shí)并非如此。實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的各類異常,很容易被當(dāng)作雜音忽略,當(dāng)作錯(cuò)誤篩除,當(dāng)作極端值排除。需要勇氣和眼光,才敢去、才能去冒險(xiǎn)挖掘異常背后的故事。這場探險(xiǎn)的旅程中,科學(xué)家是如何掌握線索、如果順藤摸瓜,如何檢索到數(shù)量稀少但卻至關(guān)重要的文獻(xiàn)的?他們?cè)鯓尤�盤思考,怎樣尋找研究的切入點(diǎn),怎樣搞清自己走到了哪一步?今天的文章講述了清華大學(xué)俞立老師發(fā)現(xiàn)和研究遷移體的歷程,希望帶給大家一些啟發(fā)。

撰文 | 俞立(膜生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

我現(xiàn)在還記得,那是2012年的一天。當(dāng)時(shí),我正在檢查前一天透射電子顯微鏡拍出的圖像。有個(gè)不尋常的東西吸引了我的眼球。那是一個(gè)位于細(xì)胞之外的囊泡,其中充滿了很多更小的囊泡,看起來像一只開口的石榴。回想起來,我以前見過類似的結(jié)構(gòu),但這張圖像的獨(dú)特之處在于,多個(gè)囊泡集中地位于胞外,有些內(nèi)部是空的,有些有少數(shù)小囊泡,還有些充滿了小囊泡。這張電鏡圖促使我開始思考這些結(jié)構(gòu)到底是什么。是死細(xì)胞的碎片?過于整潔了。是外泌體?體積太大了。是脫落小泡嗎?這倒是有可能,但囊泡內(nèi)部又有什么呢?很快,大家就把這種囊泡戲稱為石榴體(pomegranate-like structure,PLS),以這幅電鏡圖像為起點(diǎn),我們開始了對(duì)石榴體的研究之旅。

為了鑒定出石榴體的標(biāo)記蛋白,我們首先使用亞細(xì)胞分離法分離得到石榴體,再利用質(zhì)譜技術(shù)與綠色熒光蛋白(GFP)標(biāo)記的方法,很快鑒定出石榴體上富集的多種蛋白。其中,四跨膜蛋白4(Tetraspanin4,Tspan4)大量富集于PLS,能夠作為一個(gè)很好的標(biāo)記蛋白。但真正令我們吃驚的是,Tspan4同時(shí)會(huì)標(biāo)記出與一個(gè)同細(xì)胞尾端相連的膜管網(wǎng)絡(luò),而石榴體就位于這些膜管的分叉點(diǎn)或末端。它整體的外觀就像一個(gè)集成電路(圖1)。快速檢索文獻(xiàn)后,我們發(fā)現(xiàn)這些膜管是收縮絲(retraction fibers),首次發(fā)現(xiàn)于1963年(Taylor and Robbins, 1963)。不過,目前尚未有文獻(xiàn)報(bào)道過PLS結(jié)構(gòu)。利用綠色熒光蛋白標(biāo)記的Tspan4,我們實(shí)時(shí)拍攝了石榴體的形成過程,并很快發(fā)現(xiàn)它與細(xì)胞遷移相關(guān)。當(dāng)細(xì)胞遷移時(shí),收縮絲被拉出,石榴體開始在收縮絲的末端或交接處生長。隨著細(xì)胞的不斷遷移,收縮絲斷裂,石榴體從細(xì)胞上脫離。鑒于石榴體的形成依賴于細(xì)胞遷移,我們把石榴體正式命名為遷移體(migrasome)(Ma et al．, 2015)。

圖1:L929細(xì)胞(譯注:一種小鼠成纖維細(xì)胞)中的遷移體。比例尺,20微米。

在發(fā)現(xiàn)遷移體后,最重要的問題是遷移體有什么功能。在當(dāng)時(shí)的研究階段,我們無法真正回答這個(gè)問題,我們甚至不確定遷移體是否存在于活體內(nèi)。因此我們暫時(shí)繞開這一問題,轉(zhuǎn)而研究遷移體能做什么。它們是用來釋放細(xì)胞質(zhì)蛋白等細(xì)胞內(nèi)容物的嗎?的確,我們發(fā)現(xiàn)mCherry(譯注:一種紅色熒光蛋白)可以轉(zhuǎn)運(yùn)到遷移體中,隨后通過遷移體從細(xì)胞中釋放出去。我們把這一過程命名為遷移性胞吐(migracytosis)。遷移體可以介導(dǎo)細(xì)胞間通訊嗎?我們發(fā)現(xiàn)一個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生的遷移體可以被另一個(gè)細(xì)胞吞噬,這表明遷移體至少可能參與胞內(nèi)物質(zhì)在細(xì)胞之間的傳遞,因而可能介導(dǎo)細(xì)胞間通訊。雖然這些概念驗(yàn)證性的實(shí)驗(yàn)還不能告訴我們遷移體的功能究竟是什么,但這些結(jié)果讓我們提出了一系列假說,以引導(dǎo)下一階段的研究工作。

這些假說是:

1)遷移體產(chǎn)生于免疫細(xì)胞、轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞以及正在發(fā)育階段中的細(xì)胞等遷移細(xì)胞中。2)遷移體由確定的遺傳通路調(diào)控;3)遷移體可以介導(dǎo)細(xì)胞間的通訊。

在過去幾年中,我們?yōu)槔斫膺w移體所做的探索性工作主要由以上假說引導(dǎo),其中一些假說目前已經(jīng)得到證實(shí)。

除了假說之外,我們同樣需要一個(gè)研究策略。為了回答遷移體究竟具有什么功能(這可能是最重要的問題),我們需要建立一個(gè)研究遷移體的體內(nèi)模型。有了這個(gè)模型,我們就可以制備遷移體缺陷型動(dòng)物,找到這些動(dòng)物身上出現(xiàn)的問題,從而理解遷移體的生理功能。當(dāng)然,在此之前,我們首先要知道哪些基因是形成遷移體所必需的。因此,我們將研究聚焦在研究遷移體的遺傳通路和構(gòu)建遷移體的體內(nèi)模型上。在這兩個(gè)目標(biāo)之外,我們還需要開發(fā)研究遷移體的工具,特別是檢測(cè)遷移體的方法和探針。

我們現(xiàn)在只需要使用GFP標(biāo)記的遷移體標(biāo)志物,例如PH-GFP,就可以輕松地在顯微鏡下檢測(cè)到遷移體。此外,我們發(fā)現(xiàn)小麥精子蛋白WGA可以很好地將遷移體染色;基于這一發(fā)現(xiàn),我們開發(fā)了一項(xiàng)使用WGA來檢測(cè)遷移體的非常方便的方法。

遷移體形成時(shí),伸縮絲從遷移細(xì)胞的軌跡邊緣被拽出,這意味著伸縮絲必須粘附在細(xì)胞外基質(zhì)上。由于整合素(integrin)是粘附于細(xì)胞外基質(zhì)的主要分子,同時(shí)我們的質(zhì)譜分析結(jié)果也顯示遷移體上富集著整合素,因此我們將目光聚焦在整合素上。研究顯示,具有活性的整合素在遷移體形成前就已經(jīng)集合在了收縮絲的端中,活性整合素復(fù)合物和細(xì)胞外基質(zhì)互相作用,沿著收縮絲搭建了多個(gè)粘附位點(diǎn),這些位點(diǎn)隨后成為遷移體形成的位點(diǎn)(Wu et al．, 2017)。

目前,遷移體機(jī)制的研究進(jìn)展大都起源于我們對(duì)遷移體形成過程的細(xì)胞生物學(xué)研究。鑒定出Tspan4是遷移體標(biāo)志物后不久,我們還注意到,Tspan4似乎可以促進(jìn)遷移體形成。Tspan4屬于四跨膜蛋白家族,該家族有33個(gè)成員蛋白。我們發(fā)現(xiàn),其中14個(gè)成員蛋白在過量表達(dá)的情況下都可以促進(jìn)遷移體形成(Huang et al．, 2019)。所有的四跨膜蛋白都有4個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域,這些蛋白可以形成所謂的四跨膜蛋白富集的微結(jié)構(gòu)域(TEM)(Rubinstein, 2011)。TEM尺寸大約為100納米,富含一系列蛋白和脂閥類脂質(zhì),如膽固醇等。我們發(fā)現(xiàn),在遷移體形成過程中,很多小的TEM會(huì)聚集形成微米級(jí)別的宏結(jié)構(gòu)域,我們稱之為四跨膜蛋白富集的宏結(jié)構(gòu)域(TEMAs)。有意思的是,我們發(fā)現(xiàn)TEMA的形成與遷移體在收縮絲上的生長有關(guān)。這提示我們,TEMA的形成可能促使了收縮絲發(fā)生膜形變而形成遷移體。但是,我們?cè)趺床拍茯?yàn)證這個(gè)想法呢?

實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵進(jìn)展源于一個(gè)意外的發(fā)現(xiàn)。在項(xiàng)目初期,我們計(jì)劃使用體外系統(tǒng)來研究Tspan4在膜上的行為。因此,我們需要將Tspan4-GFP導(dǎo)入巨型單層脂質(zhì)體(Giant Unilamellar Vesicle, GUV)中,觀察Tspan4-GFP在膜上的行為。于是,我們首先把Tspan4整合到了蛋白脂質(zhì)體中,隨后通過電擊融合蛋白脂質(zhì)體來制備GUV。結(jié)果令人大吃一驚——在Tspan4-GFP蛋白脂質(zhì)體電擊融合的過程中,我們觀察到了一些串珠狀的結(jié)構(gòu),與遷移體及收縮絲的結(jié)構(gòu)驚人的相似;而在對(duì)照組的蛋白脂質(zhì)體的融合過程中卻沒有出現(xiàn)這樣的結(jié)構(gòu)。這個(gè)發(fā)現(xiàn)提示,Tspan4可能自己就足以驅(qū)動(dòng)遷移體的形成。然而,由于我們并不清楚電擊融合過程中究竟發(fā)生了什么,因此我們決定設(shè)計(jì)一個(gè)體外系統(tǒng),來模擬遷移體的形成過程。

指導(dǎo)我們?cè)O(shè)計(jì)體外系統(tǒng)的關(guān)鍵靈感是我們意識(shí)到遷移細(xì)胞產(chǎn)生的拉力是遷移體產(chǎn)生的關(guān)鍵因素。因此,我們?cè)O(shè)計(jì)了兩套不同的方案來將GUV拉成為膜管,以模擬收縮絲形成的過程。在第一套方案中,我們把GUV粘在流體小室中,然后使用液流推動(dòng)GUV從而制造拉力。在第二套方案中,我們使用玻璃針頭手動(dòng)從GUV拉出膜管。這兩套方案都讓我們成功地從鑲嵌了Tspan4-GFP的GUV中拉出膜管,在拉管過程中,TEM聚集形成TEMA,并在膜管上自發(fā)膨脹形成類似于遷移體的結(jié)構(gòu)。

但是,為何TEMA的聚集會(huì)導(dǎo)致膜管膨脹成遷移體呢?科研中最讓人難受的事莫過于做了一個(gè)完美的實(shí)驗(yàn)卻無法解釋其結(jié)果。萬幸的是,我與以色列特拉維夫大學(xué)(Tel Aviv University)的邁克爾·科茲洛夫(Michael Kozlov)教授相識(shí)多年,他是個(gè)物理學(xué)出身的生物物理學(xué)家,是膜塑形領(lǐng)域的頂尖專家。邁克爾教授和他實(shí)驗(yàn)室一位聰明的研究生本·祖克(Ben Zuker)很快為收縮絲到遷移體的膜形變過程建立一個(gè)數(shù)學(xué)模型。該模型表明,當(dāng)組合出的Tspan4富集的宏結(jié)構(gòu)域的彎曲剛性超過膜的其余部位,收縮絲會(huì)自發(fā)地膨脹形成遷移體。這個(gè)模型可以用下面的類比來理解:假設(shè)我們有一個(gè)直徑恒定的橡皮筋,但是不同部位的彈性不一樣,當(dāng)我們拉伸橡皮筋時(shí),拉力會(huì)把橡皮筋拉長并拉細(xì),硬的部位相比柔軟的部位拉伸得少,因此會(huì)更粗。這個(gè)模型預(yù)測(cè),TEMA的硬度會(huì)是收縮絲其余部位的5-10倍大, 在后續(xù)工作中, 原子力顯微鏡直接測(cè)量了遷移體膜的硬度,證實(shí)了這一預(yù)測(cè)。因此,遷移體的形成是由簡單的物理過程所驅(qū)動(dòng)的。

這一模型為我們提供了一個(gè)理解遷移體形成的理論框架。更重要的是,它確定了四跨膜蛋白在遷移體形成過程中的中心地位,此基礎(chǔ)上,我們得以在研究遷移體的生理功能。

在研究遷移體和遷移性胞吐的生理功能時(shí),最重要且最困難的部分是建立合適的動(dòng)物模型。當(dāng)時(shí)我們并不知道遷移體會(huì)在什么時(shí)間、什么部位、在哪種動(dòng)物里出現(xiàn)。為了讓搜索更加高效,我們制定了幾條衡量好模型的標(biāo)準(zhǔn)。首先,模型必須便于顯微鏡觀察。其次,模型需要容易開展遺傳操作。最后,我們想要的模型應(yīng)該是很容易獲得的——如果隔壁實(shí)驗(yàn)室就有,那就再好不過了。最后,我們決定嘗試斑馬魚胚胎。斑馬魚胚胎是透明的,因此是顯微鏡下研究的絕佳之選;而且基因敲除魚很容易得到;最重要的是,使用斑馬魚為模型的著名發(fā)育生物學(xué)家孟安明教授就在我們隔壁樓里。

我們首先構(gòu)建了表達(dá)遷移體標(biāo)記蛋白的斑馬魚胚胎,并用活細(xì)胞成像技術(shù)觀察這些胚胎。第一次試驗(yàn)中,我們就在活體胚胎里觀測(cè)到了大量的遷移體和收縮絲(Jiang et al．, 2019)。我們發(fā)現(xiàn)遷移體主要形成于原腸運(yùn)動(dòng)期。我們已經(jīng)知道了遷移體形成所必需的一系列基因,如itgb1b, tspan4a 和tspan7,因此我們制備了敲除上述三個(gè)基因的斑馬魚。我們發(fā)現(xiàn),遷移體的數(shù)量在敲除魚的胚胎中有所減少,更有趣的是,這些遷移體減少的斑馬魚都出現(xiàn)了器官形成的缺陷——最明顯的表型是不對(duì)稱發(fā)育缺陷,包括左右翻轉(zhuǎn),多種器官的雙側(cè)復(fù)制(譯注:即本該只在一側(cè)出現(xiàn)的器官長在了身體另一側(cè)或雙側(cè)都有)。

但這是否意味著敲除斑馬魚中的器官生成缺陷,是遷移體形成減少所致的呢?

答案是:并不一定。因?yàn)檫@些基因還具有與遷移體無關(guān)的其他功能,也可能是那些功能調(diào)控了器官生成。這樣說來,遷移體形成也完全可能與器官生成毫不相關(guān)。實(shí)際上,在很多領(lǐng)域里,當(dāng)我們?nèi)パ芯磕硞�(gè)特定的細(xì)胞內(nèi)事件的生理功能時(shí),都會(huì)遇到類似的問題,至今也沒有解決的辦法。好在我們可以純化遷移體,開展回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)(rescue)——從野生型斑馬魚胚胎里純化出遷移體,隨后注射到敲除魚的胚胎中。回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)顯示,敲除魚的胚胎在注射了遷移體后,成功地恢復(fù)了器官形成,這表明器官形成的確依賴于遷移體,而不是Tspan4和Tspan7基因中那些與遷移體無關(guān)的其他功能。

下一個(gè)問題,遷移體又是如何調(diào)控器官生成的呢?我們推斷遷移體可能包含某些信號(hào)分子,這些分子會(huì)在器官生成過程中指導(dǎo)細(xì)胞做出正確響應(yīng)。為了檢測(cè)這個(gè)理論,我們使用定量質(zhì)譜的方法分析了純化的遷移體。我們發(fā)現(xiàn),遷移體中的確富集了一批配體分子,如趨化因子、細(xì)胞因子、形態(tài)發(fā)生素、生長因子等。其中,我們特別注意到了趨化因子CXCL12,因?yàn)镃XCL12a的敲除魚出現(xiàn)了和遷移體缺陷魚相似的不對(duì)稱發(fā)育缺陷。此外,將野生斑馬魚胚胎中的遷移體注射入CXCL12a敲除的斑馬魚胚胎中,能夠成功恢復(fù)不對(duì)稱發(fā)育的缺陷。因此,我們認(rèn)為CXCL12是遷移體調(diào)控不對(duì)稱發(fā)育中的關(guān)鍵分子。

在斑馬魚胚胎中,有一種帶纖毛的器官叫庫氏泡(Kupffer’s vesicle,KV),它能導(dǎo)致其他器官的左右不對(duì)稱發(fā)育。我們發(fā)現(xiàn),遷移體對(duì)KV的形成是必需的:在遷移體缺陷的胚胎中,KV不能有效形成。KV由一組遷移性前體細(xì)胞發(fā)育而來,這組細(xì)胞被稱為背部先驅(qū)細(xì)胞(dorsal forerunner cells, DFCs)。在遷移體缺陷胚胎中,DFCs在遷移過程中跑散了,無法到達(dá)它們的目的地。這提示了一種可能性,即,遷移體作為區(qū)域性的趨化信號(hào),指引遷移型DFC到達(dá)胚胎正確位置。為驗(yàn)證這一假說,我們從野生型胚胎中純化得到遷移體,把它們嵌入瓊脂糖珠上,隨后將這些珠子插入胚胎的腹部一側(cè)(正常情況下DFCs不會(huì)在腹部出現(xiàn))。我們發(fā)現(xiàn),含有遷移體的珠子可以吸引DFCs到達(dá)腹部。因此確認(rèn),遷移體是DFCs的趨化信號(hào)。

現(xiàn)在,拼圖還剩最后一塊沒有完成。如果遷移體是DFCs的趨化信號(hào),它們一定需要在DFCs遷移路徑的終點(diǎn)區(qū)域富集。目前的研究已證實(shí)DFCs會(huì)在胚盾(譯注:即embryonic shield,脊椎動(dòng)物胚胎發(fā)育初期出現(xiàn)的不透明盾牌樣結(jié)構(gòu))富集;因此我們檢查了胚盾周圍的區(qū)域。讓我們意外的是,我們?cè)谂叨芟路桨l(fā)現(xiàn)了一個(gè)大空腔,并稱之為“胚盾腔”(embryonic shield cavity)。遷移體在這個(gè)腔體內(nèi)高度富集;當(dāng)我們向斑馬魚胚胎注射純化的遷移體時(shí),它們最終會(huì)停留在胚盾腔里。這也可以解釋我們的補(bǔ)救實(shí)驗(yàn)為何能夠成功。

以上這些工作確立了遷移體首個(gè)已知的生理功能,更重要的是,它提供了一個(gè)范例,可用來研究遷移體如何在其他生命過程中起作用。在這個(gè)范例中,信號(hào)分子被打包裝入遷移體中,隨后由遷移體在指定地點(diǎn)釋放,從而激活周圍的細(xì)胞。從這個(gè)意義上來說,遷移體可以整合空間、時(shí)間和特定化學(xué)信息,這些信息對(duì)協(xié)調(diào)胚胎發(fā)育等復(fù)雜生命過程中的細(xì)胞群體行為不可或缺。簡而言之,遷移體就是帶寄送地址的信息包裹。

圖2:遷移體的功能。

待解謎題The Known Unknowns

從我們的研究延伸開去,還存著很多明顯的問題有待回答。此處總結(jié)如下,并分享一些我的想法。

1)遷移體的生物發(fā)生機(jī)制究竟是什么?

當(dāng)前,除了我們鑒定到的少數(shù)分子,控制遷移體形成的信號(hào)通路仍不為人知。甚至,我們對(duì)遷移體的眾多基本特點(diǎn)仍不夠理解。例如,遷移體內(nèi)部的囊泡是什么?這些囊泡是如何進(jìn)入遷移體的?它們有何功能?

2)遷移體水平傳遞是否有生理功能?

我們知道遷移體能夠被周圍細(xì)胞吞掉,這可能是細(xì)胞之間物質(zhì)傳遞的一種機(jī)制。最近,我們發(fā)現(xiàn)遷移體中會(huì)選擇性地富集一些種類的mRNA,當(dāng)遷移體被周圍細(xì)胞吞掉后,遷移體中的mRNA會(huì)在吞掉遷移體的細(xì)胞中翻譯成蛋白,并改變?cè)摷?xì)胞的行為 (Zhu et al, Cell Research, accepted)。當(dāng)前,我們還不清楚遷移體除mRNA和蛋白外還可以傳遞哪些物質(zhì),也不清楚這種細(xì)胞間物質(zhì)傳遞是否在體內(nèi)發(fā)生并具有生理功能。

3)除了胚胎發(fā)育,遷移體還在哪些生物過程中起到重要作用?

很多免疫細(xì)胞在發(fā)育和免疫應(yīng)答過程中會(huì)發(fā)生遷移,并分泌大量信號(hào)分子。這聽上去就像是遷移體可以大展身手的場景。

4)遷移體有細(xì)胞自主性的功能嗎?

細(xì)胞可否使用遷移體來吐出不想保留的物質(zhì)?這樣可以維持自身穩(wěn)態(tài)、丟棄受損或有害的細(xì)胞成分、維持表面分子數(shù)目的最優(yōu)水平……

5)遷移體的進(jìn)化起源是什么?

它們來源于進(jìn)化早期的單細(xì)胞生物,還是在多細(xì)胞生物出現(xiàn)后才出現(xiàn)?使用動(dòng)物界內(nèi)早期分支的模式生物系統(tǒng),或許能夠幫助我們回答這個(gè)有意思的問題。

科學(xué)史提醒我們,在我們能想到的待解之謎外,總有“未知的”未知——憑我們現(xiàn)有的知識(shí),根本無法預(yù)料將來還會(huì)遇到哪些問題。面對(duì)這些未知的未知,我們必須承認(rèn),大自然總是比我們想的更復(fù)雜。我們要有一顆敢于不斷挑戰(zhàn)已有模式的心,也需要有一雙銳利的眼睛,能挑出現(xiàn)有理論框架下無法解釋的現(xiàn)象。懷著這樣的心態(tài),或許再加上點(diǎn)好運(yùn),我們終將開啟滿是未知卻新奇的世界。

參考文獻(xiàn)

1． Chen, L．, Ma, L．, and Yu, L． (2019)． WGA is a probe for migrasomes． Cell Discovery 5．

2． Huang, Y．, Zucker, B．, Zhang, S．, Elias, S．, Zhu, Y．, Chen, H．, Ding, T．, Li, Y．, Sun, Y．, Lou, J．, et al． (2019)． Migrasome formation is mediated by assembly of micron-scale tetraspanin macrodomains． Nat Cell Biol 21, 991-1002．

3． Jiang, D．, Jiang, Z．, Lu, D．, Wang, X．, Liang, H．, Zhang, J．, Meng, Y．, Li, Y．, Wu, D．, Huang, Y．, et al． (2019)． Migrasomes provide regional cues for organ morphogenesis during zebrafish gastrulation． Nat Cell Biol 21, 966-977．

4． Ma, L．, Li, Y．, Peng, J．, Wu, D．, Zhao, X．, Cui, Y．, Chen, L．, Yan, X．, Du, Y．, and Yu, L． (2015)． Discovery of the migrasome, an organelle mediating release of cytoplasmic contents during cell migration． Cell Res 25, 24-38．

5． Rubinstein, E． (2011)． The complexity of tetraspanins． Biochem Soc Trans 39, 501-505．

6． Taylor, A．C．, and Robbins, E． (1963)． Observations on microextensions from the surface of isolated vertebrate cells． Dev Biol 6, 660-673．

7． Wu, D．, Xu, Y．, Ding, T．, Zu, Y．, Yang, C．, and Yu, L． (2017)． Pairing of integrins with ECM proteins determines migrasome formation． Cell Res 27, 1397-1400．

8． Zhao, X．, Lei, Y．, Zheng, J．, Peng, J．, Li, Y．, Yu, L．, and Chen, Y． (2019)． Identification of markers for migrasome detection． Cell Discov 5, 27．