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抗體偶聯(lián)藥物（ADCs）是一種通過一個合理構(gòu)建的連接子將細胞毒性小分子藥物偶聯(lián)到單克隆抗體上的復(fù)合物，可以向腫瘤內(nèi)選擇性地輸送有效的細胞毒性藥物。經(jīng)過幾十年的深入研究和開發(fā)，該領(lǐng)域取得了重大進展，自2000年美國食品和藥物管理局（FDA）批準第一個ADC藥物Mylotarg治療CD33＋急性髓系白血病（AML）以來，全球共有14個ADC獲得批準。

值得注意的是，在2020年第四季度，有三項重磅交易涉及針對同一抗原ROR1的ADC。首先，CStone Pharmaceuticals和LegoChem Biosciences簽訂了ROR1 ADC“LCB71（CS5001）”的全球許可協(xié)議。然后默克收購了VelosBio及其ROR1 ADC“VLS－101”，勃林格殷格翰分別以27．5億美元和14．5億美元（合并預(yù)付款和里程碑付款）收購了NBE Therapeutics及其ROR1 iADC“NBE－002”，這些收購?fù)伙@了ROR1在腫瘤學(xué)中的重要性及其作為ADC靶點的良好前景。

ROR1的結(jié)構(gòu)和表達

ROR1是一種跨膜受體，包含細胞外部分、跨膜區(qū)和細胞內(nèi)區(qū)域。細胞外部分包括免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域（IG）、富含半胱氨酸結(jié)構(gòu)域（CRD）和Kringle結(jié)構(gòu)域（KD）。CRD通過與配體Wnt5a結(jié)合來調(diào)節(jié)非經(jīng)典WNT信號，KD介導(dǎo)ROR1與其他受體的相互作用，如ROR2。

細胞內(nèi)部分包括一個酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域、兩個富含絲氨酸／蘇氨酸的結(jié)構(gòu)域和一個富含脯氨酸的結(jié)構(gòu)域。富含脯氨酸的結(jié)構(gòu)域通過招募包含SH3結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，包括HS1、DOCK2和cortactin，負責激活細胞遷移和增殖信號。富含絲氨酸／蘇氨酸的結(jié)構(gòu)域與銜接蛋白（如14－3－3 zeta）發(fā)生物理相互作用，導(dǎo)致對凋亡的抵抗。

ROR1主要在胚胎發(fā)生過程中表達，ROR1基因敲除對胚胎是致命的，表明ROR1在胚胎發(fā)生中起著關(guān)鍵作用。ROR1在大多數(shù)成人組織中不表達，除了一些高表達ROR1的脂肪組織、內(nèi)分泌腺、胃腸道和未成熟B淋巴細胞，ROR1在這些成人組織中的功能目前尚不清楚。

ROR1在惡性腫瘤中的作用

許多研究表明，ROR1在惡性腫瘤細胞中高表達，其最初被鑒定為血液系統(tǒng)惡性腫瘤中的腫瘤胚胎基因。除了血液系統(tǒng)惡性腫瘤外，ROR1的異常表達也作為生物標記物和治療靶點在多種實體瘤中被發(fā)現(xiàn)。

ROR1在乳腺癌中高表達，其與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）、腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲性疾病有關(guān)。ROR1在肺癌細胞中的表達水平也很高，可作為肺腺癌患者的預(yù)后生物標志物。ROR1的沉默導(dǎo)致代表人肺腺癌的細胞系中的生長抑制。此外，還有關(guān)于ROR1在其他類型癌癥中表達的報道，包括卵巢癌、結(jié)直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、胃癌、黑色素瘤和胰腺癌。

ROR1不僅在惡性細胞中異常表達，還參與對細胞增殖、存活和遷移重要的信號蛋白的激活。在CLL中，Wnt5a／ROR1通過ARHGEF家族銜接蛋白激活Rho GTPase RhoA和Rac1，Wnt5a還誘導(dǎo)HS1的酪氨酸磷酸化，導(dǎo)致ROR1依賴的細胞遷移。此外，Wnt5a／ROR1誘導(dǎo)NF－κB信號通路的激活，導(dǎo)致促炎癥細胞因子如IL－6的自分泌調(diào)節(jié)。ROR1的表達水平與CLL的進展密切相關(guān)，使其成為預(yù)后的良好生物標志物。在肺癌中，ROR1參與c－Src和MET的激活，導(dǎo)致腫瘤細胞凋亡的抑制，ROR1還被發(fā)現(xiàn)是cavin－1和caveolin－1的支架蛋白，可激活肺腺癌中的AKT。在乳腺癌中，ROR1促進了PI3K／AKT通路的激活，高ROR1表達與疾病更嚴重的進展相關(guān)�？傊�，在許多類型的惡性腫瘤中觀察到ROR1的異常表達和相關(guān)的促生長信號事件，使ROR1成為抗癌藥物開發(fā)的一個有吸引力的治療靶點。

ROR1靶向ADC的研究進展

鑒于ROR1在多種癌癥中高表達，而在普通組織不表達或低表達的特性，藥物研發(fā)人員開發(fā)了多種靶向ROR1的抗腫瘤治療策略，其中ADC藥物的進展較快，并且表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。

NBE－002

目前，大多數(shù)經(jīng)批準的ADC都是通過賴氨酸或半胱氨酸殘基將有效載荷與單克隆抗體化學(xué)偶聯(lián)而產(chǎn)生的藥物異質(zhì)混合物。相比之下，針對下一代ADC，NBE－002的ROR1是通過人源化抗體（huXBR1－402）與蒽環(huán)類藥物PNU－159682在預(yù)先設(shè)定的藥物抗體比（DAR）下通過sortase a介導(dǎo)的位點特異性轉(zhuǎn)肽反應(yīng)進行酶結(jié)合而產(chǎn)生的，產(chǎn)生更純凈、更同質(zhì)的藥物，具有更穩(wěn)定的生物物理和藥代動力學(xué)特征。

SMAC技術(shù)利用Sortase A，一種源自金黃色葡萄球菌的轉(zhuǎn)肽酶，可以催化含有寡甘氨酸的分子連接到具有序列基序的蛋白質(zhì)（LPXTG）。PNU－159682是奈莫霉素的肝臟代謝物，可抑制DNA拓撲異構(gòu)酶II，其效力比親本分子高三個數(shù)量級。有趣的是，與其他有效載荷相比，基于蒽環(huán)類的連接子有效載荷通過SMAC技術(shù)的共軛效率更高，DAR在3．7到3．9之間，通過簡單的鏈霉素親和層析步驟可以有效地將DAR增加到4。

除了觀察到NBE－002的直接抗腫瘤活性外，NBE－002能夠增加T細胞對腫瘤的浸潤，并將“冷”腫瘤轉(zhuǎn)化為“熱”腫瘤，使它們對針對PD－1和CTLA－4的檢查點抑制劑產(chǎn)生反應(yīng)。因此，NBE Therapeutics的ADC被稱為免疫刺激ADC或IADC。為了測試NBE－002的效力，已經(jīng)在不同的臨床前癌癥模型中評估了這種iADC，發(fā)現(xiàn)NBE－002在每個適應(yīng)癥中都顯示出顯著的抗腫瘤活性。NBE－002目前正在進行1／2期臨床試驗（NCT04441099），以評估晚期實體瘤，尤其是三陰性乳腺癌患者的安全性和耐受性。

VSL－101

與Adcetris、Polivy和Padcev類似， VLS－101利用蛋白水解可切割的連接子mc vc PAB，將靶向ROR1的單克隆抗體UC－961與微管蛋白聚合抑制劑單甲基auristatin E（MMAE）進行偶聯(lián)。UC－961是一種人源化抗體，以高親和力（Kd＝2nM）結(jié)合到ROR1的域內(nèi)表位，并通過阻斷Wnt5a與ROR1的結(jié)合，對各種ROR1陽性腫瘤細胞具有直接細胞毒活性。

由于UC－961識別獨特的表位，這種抗體在結(jié)合時會觸發(fā)ROR1的明顯內(nèi)化，有利于向ROR1陽性腫瘤細胞傳遞細胞毒性有效載荷。VLS－101在體外模型中被證明能有效誘導(dǎo)細胞周期阻滯和凋亡，并在異種移植物模型中有效阻斷體內(nèi)腫瘤生長。在血液系統(tǒng)惡性腫瘤的一期研究（NCT03833180）中，VLS－101耐受良好，對晚期套細胞淋巴瘤（MCL）或彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）患者有效，MCL組的ORR達47％（7／15），包括3例CR和4例PR；DLBCL組的ORR達80％（4／5），包括2例CR和2例PR。目前，一項針對實體瘤（包括乳腺癌和肺癌）患者的2期研究（NCT04504916）正在進行中。

LCB71（CS5001）

LCB71是另一種抗ROR1 ADC，由LegoChem Biosciences和ABL Bio兩家韓國生物制藥公司共同開發(fā)，基石藥業(yè)獲得了在韓國境外開發(fā)和商業(yè)化LCB71的專有權(quán)。LCB71使用了另一種酶介導(dǎo)的位點特異性偶聯(lián)技術(shù)，這種偶聯(lián)方法利用法尼基轉(zhuǎn)移酶，該酶天然催化CaaX基序中存在的半胱氨酸殘基的異戊二烯基化。

該技術(shù)利用法尼基轉(zhuǎn)移酶的底物混雜性，引入香葉基酮焦磷酸（GKPP）基團，用于隨后的烷氧基胺衍生物的化學(xué)選擇性偶聯(lián)。通過偶聯(lián)β－葡萄糖醛酸鍵的吡咯苯二氮卓二聚體（dPBD），利用β－葡萄糖醛酸酶在腫瘤細胞和腫瘤微環(huán)境中的高表達，允許選擇性切割和釋放細胞中的游離PBD，最終導(dǎo)致DNA損傷和細胞死亡。

LCB71在Jeko－1（人套細胞淋巴瘤）和MDA－MB－231（人乳腺癌細胞）異種移植瘤模型中均表現(xiàn)出顯著的抗腫瘤活性，且呈劑量依賴性。LCB71是一款有望在ROR1高表達的血液腫瘤和惡性實體瘤中都具有精準治療潛力的候選ADC藥物。

小結(jié)

ROR1在各種實體和血液腫瘤細胞中廣泛表達，使其作為AD 藥物開發(fā)的極具吸引力的重要靶點。由于獨特的位點特異性偶聯(lián)策略，NBE－002和LCB71都是具有給定DAR的同質(zhì)ADC，這有利于生產(chǎn)制造。此外，兩種ADC中的穩(wěn)定連接子也提供了更好的藥代動力學(xué)特征。盡管VLS－101的產(chǎn)品不是同質(zhì)性的，可能存在類似于Adcetris、Polivy和Padcev的穩(wěn)定性問題，但一項1期研究已經(jīng)證明了MCL和DLBCL患者的安全性和臨床療效，是目前處于2期臨床試驗中的最領(lǐng)先的抗ROR1 ADC。無論如何，所有3個抗ROR1 ADC看起來都非常有前景，而最近的3個主要商業(yè)交易可能會促進針對ROR1的多種治療方式的快速發(fā)展。

參考文獻：

1．Tyrosine Kinase ROR1 as a Target forAnti－Cancer Therapies． Front Oncol． 2021； 11： 680834．

2． Perspectives on the development ofantibody－drug conjugates targeting ROR1 for hematological and solid cancers． AntibTher． 2021 Oct； 4（4）： 222–227．

       原文標題 : ROR1靶向ADC的腫瘤治療前景